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CAS檢測培養基原理和使用方法

更新時間:2025-05-30   點擊次數:257次

一、氫氧化細菌和鐵載體的簡介:

  氫氧化細菌(Hydrogen-oxidizing bacteria)是一類能通過氧化氫氣獲得能量,固定二氧化碳作為唯yi碳源的微生物,土壤中分布廣泛,尤其是豆科植物根際大量存在。氫氧化細菌沒有單獨的分類,多分布在假單胞菌屬、副球菌屬、黃桿菌屬、分支桿菌屬、產堿菌屬、諾卡氏菌屬、醋酸桿菌屬及棒桿菌屬等。絕大部分氫氧化細菌是兼性化能自養型,它們可以自養生長、異養生長、甚至混合營養生長,好氧或兼性厭氧。氫氧化細菌屬于植物根際促生菌,在農作物增產方面有巨大的應用潛力,所以其各種促生機制的研究已成為熱點,其中分泌鐵載體就是幾種重要的促生機制之一。

  鐵載體(siderophore)是一類能特異性結合鐵離子并供給微生物細胞的低分子量物質。鐵元素是微生物生長的必需元素,在缺鐵的環境中微生物會分泌鐵載體螯合鐵離子滿足自身生長需要。目前,常用的鐵載體檢測方法為Schwyn和Neilands發明的通用CAS瓊脂平板法,當細菌產生的鐵載體與由鉻天青S(CAS)、十六烷基三甲基溴化銨(HDTMA)、鐵離子組成的藍色復合物結合后,會奪走鐵離子,使細菌周圍的培養基顏色由藍色變為橘黃色,出現鐵載體分泌圈,有利于判斷細菌是否產生鐵載體。


二、CAS檢測培養基

  1. 產品用途:用于細菌鐵載體篩選試驗。

  2. 配方(mg/L):

鉻天青S(CAS)

60.5

十六烷基三甲基溴化銨(HDTMA)

72.9

六水氯化鐵

2.645

二水磷酸二氫鈉

295.25

十二水磷酸氫二鈉

1213.5

氯化銨

125

磷酸二氫鉀

37.5

氯化鈉

62.5

瓊脂

9000

pH值6.8±0.1(25℃)


三、試驗方法:

  1. 稱取本品10.87g,加熱煮沸完-全溶解于1000mL蒸餾水中,分裝三角瓶,116℃高壓滅菌30分鐘,冷卻至50℃時,傾入無菌平皿,備用;

  2. 用接種環挑取質控菌株新鮮培養物點種到平板上;

  3. 放置35℃需氧培養24小時,記錄試驗結果。


四、試驗結果判斷:

  接種以下質控菌株,放置于35℃需氧培養24小時。

質控菌株

菌株編號

接種量(CFU)

參比或計數培養基

質控結果

銅綠假單胞菌

ATCC 9027

/

/

菌落周圍有黃色環


圖1 銅綠假單胞菌ATCC 9027在CAS檢測培養基菌落特征




注:本文屬海博生物原創,未經允許不得轉載。



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